Информационная система "Конференции"


Вторая научная конференция с международным участием "ЭНДОКРИННАЯ РЕГУЛЯЦИЯ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ ФУНКЦИЙ В НОРМЕ И ПАТОЛОГИИ", посвященная 80-летию со дня рождения профессора Михаила Григорьевича Колпакова

Россия, Новосибирск, Академгородок с 15 по 17 октября 2002 года

Тезисы докладов

РАЗРАБОТКА ЭФФЕКТИВНЫХ СПОСОБОВ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕПТИНА ЧЕЛОВЕКА

Алиев Т.К., Кривцов В.Ф.*, КарповаС.К.*, Панина А.А.#, Варфоломеев С.Д., Коробко В.Г.#, Панков Ю.А.*

МГУ им. М.В. Ломоносова,
Химический факультет *Эндокринологический научный центр РАМН #Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН,
Москва

Исследование физиологических свойств лептина человека предполагает создание эффективного способа получения данного гормона из экзогенных источников. Критериями разрабатываемого метода являются идентичность функциональных свойств нативного лептина человека и биосинтетического аналога, надежность и невысокая себестоимость биотехнологического процесса. В основу предлагаемого способа получения положен бактериальный синтез лептина в клетках Escherichia coli. Для реализации данного подхода на основе кДНК лептина человека были сконструированы экспрессионные плазмиды, предназначенные для синтеза и накопления белка как в цитоплазме, так и в периплазме бактерий. Показано, что периплазматический способ получения характеризуется более высоким процентным содержанием растворимой функционально-активной формы гормона, но не позволяет получать белок в больших количествах в силу особенностей природы периплазматического синтеза белков. При использовании плазмиды pTrcTE-Lep, ориентированной на высокопродуктивный синтез белка в цитоплазме, удалось получить лептин в количестве, превышающем 40% от суммарного клеточного белка (заявка на изобретение № 2000123142 от 07.09.2000). Синтезируемый белок преимущественно накапливается в нерастворимом виде в форме телец включения, что обусловливает крайне низкое содержание примесей клеточных белков при последующей очистке получаемого препарата. Функционально-активный растворимый лептин человека был получен в результате солюбилизации телец включения и последующей ренатурации белка. В результате определения N-концевой аминокислотной последовательности, а также методами иммуно-ферментного анализа и кругового дихроизма установлено, что по своим структурным и функциональным характеристикам биосинтетический лептин полностью соответствует природному аналогу.

Примечание. Тезисы докладов публикуются в авторской редакции

Ваши комментарии
Обратная связь
[ICT SBRAS]
[Головная страница]
[Конференции]

© 1996-2000, Институт вычислительных технологий СО РАН, Новосибирск
© 1996-2000, Сибирское отделение Российской академии наук, Новосибирск
    Дата последней модификации: 06-Jul-2012 (11:45:21)